Чл. 4

Член 4 Влизане в сила и дата на прилагане Настоящият регламент влиза в сила на двадесетия ден след деня на публикуването му в Официален вестник на Европейския съюз. Той се прилага от 25 юли 2024 г. Член 3 обаче се прилага от 25 юли 2022 г.

L 178/6 BG Официален вестник на Европейския съюз 5.7.2022 г. Настоящият регламент е задължителен в своята цялост и се прилага пряко във всички държави членки. Съставено в Брюксел на 4 юли 2022 година. За Комисията Председател Ursula VON DER LEYEN

ПРИЛОЖЕНИЕ I ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ВСИЧКИ ОБХВАНАТИ ИЗДЕЛИЯ Част I — Изисквания за характеристиките на действието на изделията, попадащи в обхвата на приложения II—XIII Характеристики на действието Всички характеристики на действието, посочени в точка 9.1, букви а) и б), точка 9.3 и точка 9.4, буква а) от приложение I към Регламент (ЕС) 2017/746 Изискване

1. Определянето на характеристиките на действието се извършва чрез пряко сравнение с изделие, отговарящо на най-съвременните постижения. Изделието, използвано за сравнение, трябва да е с маркировка „СЕ“, ако се предлага на пазара по време на оценката на действието.
2. Изделията за уточняване на статуса на пробите, които се използват при определянето на характеристиките на действието, отговарят на най-

съвременните постижения и са с маркировка „СЕ“.

1. Ако при определянето на характеристиките на действието се установят несъответстващи резултати, те се изясняват, доколкото е възможно,

чрез едно или повече от следните действия: — чрез оценка на несъответстващата проба в други изделия, — чрез използване на алтернативен метод или маркер, — чрез преглед на клиничното състояние и на диагнозата на пациента, — чрез тестване на последващи проби за проследяване на резултатите от тестовете.

1. Определянето на характеристиките на действието се извършва върху популация, която е съпоставима с населението на Европа.

Общ процент на грешки

1. В рамките на изисквания анализ на риска общият процент на грешки, които довеждат до получаване на погрешно отрицателни резултати,

се определя при повторни анализи върху слабоположителни проби. Аналитична чувствителност и аналитична специфичност, смущения

1. За изделията, предназначени за използване с плазма, производителят проверява действието на изделието, като използва всички антикоагуланти, които е посочил за използване с изделието, за най-малко 50 проби плазма (за изделията, предназначени за откриване и/или количествено определяне на инфекциозни агенти — 25 положителни и 25 отрицателни проби).

Аналитична и диагностична специфичност, интерференция и кръстосана реактивност Повторяемост на партидите

1. Производителят избира евентуалните интерфериращи вещества, чийто ефект трябва да се оцени, като взема предвид състава на реактивите и

конфигурацията на изделието.

1. За изделията, предназначени за откриване на антигени и антитела, с критериите на производителя за изпитване на партиди се гарантира, че изделията от всяка партида последователно установяват съответните антигени, епитопи и антитела и са подходящи за заявените видове проби.
2. Проверката за освобождаване на партиди от производителя за тестовете от първа линия включва минимум 100 проби, които са

отрицателни за съответния аналит (1). (1) Това изискване не се прилага за изделия, обхванати в таблици 1 и 2 от приложение ХIII. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 7

Част II — Изисквания за характеристиките на действието на изделията, посочени в приложения III—XIII Характеристика на действието Аналитична и диагностична чувствителност Изискване

1. Изделията, предназначени от производителя за извършване на тестове върху телесни течности, различни от серум или плазма — напр. урина, слюнка и т.н. — отговарят на същите изисквания като изделията за серум или плазма. Производителят тества проби от едни и същи лица както в изделията, които трябва да бъдат одобрени, така и в съответното изделие за серум или плазма. (1)
2. Изделията за самотестване отговарят на същите изисквания като съответните изделия за професионална употреба.
3. Използваните положителни проби за оценка на действието се подбират по такъв начин, че да са представителни за различните стадии на

съответното(ите) заболяване(ия), различните профили на антителата, различните генотипове, различните подтипове, мутанти и т.н.

1. Панелите за сероконверсия започват с един или няколко отрицателни кръвни теста и поддържат тесни интервали между кръвните тестове,

доколкото е възможно. Когато това не е възможно, производителите представят обосновка в доклада за оценка на действието.

1. За изделия, за които производителят е определил предназначение за използване със серум и плазма, оценяването на действието трябва да докаже еквивалентността спрямо серум и плазма. Това доказване се извършва за най-малко 25 кръводарявания с положителни проби.
2. За изделията, които служат за откриване или количествено определяне на антигени или нуклеинови киселини, съответно целевият(ите)

антиген(и) или район(и) на целевата нуклеинова киселина се посочва в инструкциите за употреба.

1. За изделията, които служат за откриване или количествено определяне на антитела срещу инфекциозен агент, целевият(те) антиген(и) на

тези антитела се посочва(т) в инструкциите за употреба. Аналитична и диагностична специфичност

1. Изделията, предназначени от производителя за извършване на тестове върху телесни течности, различни от серум или плазма — напр. урина, слюнка и т.н. — отговарят на същите изисквания като изделията за серум или плазма. При оценката на действието се тестват проби от едни и същи лица както в изделията, които трябва да бъдат одобрени, така и в съответното изделие за серум или плазма. (1)

1. Изделията за самотестване отговарят на същите изисквания като съответните изделия за професионална употреба.
2. Използваните отрицателни проби при оценката на действието се определят така, че да отразяват целевата група, за която е предназначено

изделието, като например кръводарители, хоспитализирани пациенти, бременни жени и т.н.

1. Специфичността е въз основа на реактивните повторяеми погрешно положителни резултати сред пробите, които са отрицателни за

белязания маркер.

1. За изделия, за които производителят е определил предназначение за използване със серум и плазма, оценяването на действието трябва да докаже еквивалентността спрямо серум и плазма. Това доказване се извършва за най-малко 25 кръводарявания с отрицателни проби.

L 1 7 8 / 8 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Аналитична и диагностична специфичност, интерференция и кръстосана реактивност

1. Производителят включва проби, като например, когато е приложимо:

— проби, представляващи сродни инфекции, — проби от мултигравидни жени, т.е. от жени с повече от една бременност, или от пациенти с положителен ревматоиден фактор (РФ); — проби, съдържащи човешки антитела срещу компонентите на системата за генна експресия, например anti-E. coli или противогъбични. Действия, получени от неспециалисти

1. Съответните части от оценката на действието се извършват (или повтарят) от подходящи неспециалисти, за да се одобрят действието на изделието и инструкциите за употреба. Неспециалистите, избрани за оценка на действието, са представителни за групите целеви потребители.

(1) Това изискване не се прилага за изделия, посочени в таблици 4, 5 и 6 от приложение ХIII. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 9

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ НА КРЪВНОГРУПОВИ АНТИГЕНИ СПОРЕД СИСТЕМИТЕ ABO, RH, KELL, DUFFY И KIDD ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ НА КРЪВНИТЕ ГРУПИ ПРИЛОЖЕНИЕ II Обхват Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване на кръвногрупови антигени според системите ABO, Rh, Kell, Duffy и Kidd за определяне на кръвните групи. Таблица 1 се отнася за оценката на действието на изделия за откриване на кръвногрупови антигени според системите ABO, Rh, Kell, Duffy и Kidd за определяне на кръвните групи. Таблица 2 се отнася за извършваното от производителя тестване на съответствието между отделните партиди реактиви и продукти от реактиви за определяне на кръвногруповите антигени според системите ABO, Rh, Kell, Duffy и Kidd за определяне на кръвните групи (реактиви за тест, контролни материали). Таблица 1. Оценка на действието на изделия за откриване на кръвногрупови антигени според системите ABO, Rh, Kell, Duffy и Kidd за определяне на кръвните групи. Специфичност на реактива

Брой тестове за всеки метод, заявен от производителя Общ брой проби за тестване при пускане на ново изделие Общ брой проби за тестване при нова рецептура или при използване на добре характеризирани реактиви Anti-ABO1 (Anti-A), Anti-ABO2 (Anti-B), Anti-ABO3 (Anti-A, B) ≥ 500 ≥ 3 000 ≥ 1 000 Anti-RH1 (Anti-D) ≥ 500 ≥ 3 000 ≥ 1 000 Общи критерии за квалификация Клинични проби: 10 % от тестовата популация Неонатални проби: > 2 % от тестовата популация Anti-RH2 (Anti-C), Anti-RH4 (Anti-c), Anti- RH3 (Anti-E) ≥ 100 ≥ 1 000 ≥ 200 Anti-RH5 (Anti-e) ≥ 100 ≥ 500 ≥ 200 Специфични критерии за квалификация Критерии за приемане В пробите ABO се съдържат > 40 % положителни проби за антигени A и B, които е възможно да включват проби от група A, група B и група AB В оценката на действието на реактивите за anti-D са включени тестове върху серия от проби със слаб и частичен RH1 (D)- антиген от в предназначението на продукта. Клетките със слаб и/или частичен D-антиген съставляват > 2 % от RH1 (D) положителните проби.

зависимост При всички реактиви се наблюдава съпоставимо действие спрямо изделията, които отговарят на най-съвременните постижения и са с маркировка „СЕ“, по отношение на заявената реактивност на изделието. За изделия с маркировка „СЕ“, в случай на на промяна приложението или на употребата, се провеждат други тестове в зависимост от изискванията, които са посочени в колона 2 по-горе („Брой тестове за всеки метод, заявен от производителя“). разширяване или L 1 7 8 / 1 0 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Anti-KEL1 (Anti-K) Anti-JK1 (Jka), Anti- JK2 (Jkб) Anti-FY1 (Fya), Anti- FY2 (Fyб) ≥ 100 ≥ 100 ≥ 100 ≥ 500 ≥ 500 ≥ 500 ≥ 200 ≥ 200 ≥ 200 Забележка: Положителните проби, които се използват за оценка на действието, се избират, като се включват вариращи и отслабени фенотипове. Таблица 2. Извършвано от производителя тестване на съответствието между отделните партиди реактиви и продукти от реактиви за определяне на кръвногруповите антигени според системите ABO, Rh, Kell, Duffy и Kidd за определяне на кръвните групи

1. Реактиви за тест

Реактиви за определяне на кръвната група Anti-ABO1(Anti-A) Anti-ABO2(Anti-B) Anti-ABO3(Anti-A,B) Anti-RH1 (Anti-D) Anti-RH2 (Anti-C) Anti-RH4 (Anti-c) Минимален брой контролни клетки, които да бъдат изследвани като част от тестването за специфичност Критерии за приемане При всяка партида реактиви се наблюдават недвусмислени положителни или отрицателни резултати с помощта на всички съгласно получените резултати от данните за оценка на действието. заявени от производителя,

техники, Положителни реакции Отрицателни реакции A1 2 B 2 A1 2 R1r 2 R1R2 2 R1R2 1 R1R2 A2B 2 A1B 2 A2 2 R2r 2 R1r 1 R1r 2 R2r Ax 2 (1) Ax 2 (1) Слаб D-анти- ген B 2 2 (1) r’r 1 r’r 1 r”r B 2 A1 2 O 4 r’r 1 R2R2 1 R1R1 3 R1R1 O 2 O 2 r”r 1 r”r 1 r’r rr 1 rr 1 rr . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 1 1

1 R2r 1 1 r”r 1 Anti-RH3 (Anti-E) Anti-RH5 (Anti-e) Anti-KEL1 (Anti-K) Anti-JK1 (Anti-Jka) Anti-JK2 (Anti-Jkб) 2 R1R2 2 Kk 4 Jk(a+b+) 4 Jk(a+b+) 4 Fy(a+b+) Anti-FY1 (Anti-Fya) 4 Anti-FY2 (Anti-Fyб) 4 Fy(a+b+) 1 1 1 R2R2 3 kk 3 Jk(a–b+) 3 Jk(a+b–) 3 Fy(a–b+) 3 Fy(a+b–) 3 Забележка: Поликлоналните реактиви се тестват върху по-голям панел от клетки, за да се потвърди специфичността и да се изключи присъствието на нежелателни контаминантни антитела. (1) Единствено след потвърждение на реактивността срещу тези антигени.

1. Контролни материали (червени кръвни клетки)

Фенотипът на червените кръвни клетки, използвани за контрол на реактивите за определяне на кръвния тип, изброени по-горе, е потвърден с помощта на одобрено(и) изделие(я). L 1 7 8 / 1 2 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ЧОВЕШКИЯ ИМУНОДЕФИЦИТЕН ВИРУС (HIV) ПРИЛОЖЕНИЕ III Обхват

1. Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с човешкия имунодефицитен вирус (HIV).

Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за антитела срещу HIV-1/2 (anti-HIV 1/2) и за комбинираните тестовете от първа линия за антигени/антитела срещу HIV 1/2 (HIV 1/2 Ag/ Ab), които не са бързи тестове. Таблица 2 се отнася за тестовете от първа линия за anti-HIV 1/2 и HIV 1/2 Ag/Ab, които са бързи тестове. Таблица 3 се отнася за тестовете за потвърждение за anti-HIV 1/2. Таблица 4 се отнася за антигенните тестове за HIV-1 и тестовете за HIV Ag/Ab. Таблица 5 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за рибонуклеинова киселина (РНК) на HIV. Таблица 6 се отнася за тестовете за самотестване за HIV-1/2. Определения

1. За целите на настоящото приложение се прилагат следните определения:

(1) под „HIV проба за сероконверсия“ се разбира проба, която е: — положителна за наличие на p24 антигени и/или на РНК на HIV; — разпозната от тестовете от първа линия за антитела, и — дала положителен или неопределен резултат при тестовете за потвърждение. (2) под „HIV проба за ранна сероконверсия“ се разбира проба, която е: — положителна за наличие на p24 антигени и/или на РНК на HIV; — неразпозната от тестовете от първа линия за антитела, и — дала неопределен или отрицателен резултат при тестовете за потвърждение. Таблица 1. Тестове от първа линия: anti-HIV-1/2, HIV-1/2 Ag/Ab (изисквания за откриване на антитела) Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 HIV-1 ≥ 100 HIV-2 включително 40 подтипа, различни от В включително 25 положителни пресни серумни проби „от същия ден“ (≤ 1 ден след вземането на пробата) всички действително положителни проби се установяват като положителни . . 5 7 2 0 2 2

г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 1 3

Панели за сероконверсия всички налични HIV/1 подтипове са представени от най-малко 3 проби от подтип ≥ 30 панела тестват се най-малко 40 HIV проби за ранна сероконверсия Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) (1) ≥ 5 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 (като RF+, от сродни вирусни инфекции, от бременни жени, от лица, наскоро ваксинирани срещу някакъв инфекциозен агент) диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения всички HIV проби за сероконверсия са идентифицирани като положителни ≥ 99,5 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва кръводарителите за първи път. Таблица 2. Бързи тестове: anti-HIV-1/2, HIV-1/2 Ag/Ab (изисквания за откриване на антитела)

Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 HIV-1 ≥ 100 HIV-2 включително 40 подтипа, различни от В всички налични HIV/1 подтипове са представени от най-малко 3 проби от подтип всички действително положителни проби се установяват като положителни Панели за сероконверсия ≥ 30 панела тестват се най-малко 40 HIV проби за ранна сероконверсия диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения всички HIV проби за сероконверсия са идентифицирани като положителни Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) ≥ 1 000 ≥ 99 % L 1 7 8 / 1 4 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 проби от бременни жени общо ≥ 100 други проби с потенциална кръстосана реактивност (напр. RF+, от сродни инфекции) Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 200 HIV-1 ≥ 100 HIV-2 Идентифициране като „потвърдено положителни“ или „неопределени“, а не като „отрицателни“ Таблица 3. Тестове за потвърждение: anti-HIV-1/2 Панели за сероконверсия Включително от различни стадии на инфекцията и представляващи различни профили на антитела ≥ 15 панела за сероконверсия/панела с нисък титър ≥40 HIV проби за ранна сероконверсия Диагностична специфичност Кръводарители Кръстосана реактивност Хоспитализирани пациенти Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 ≥ 200 общо ≥ 50 (включително проби от бременни жени, проби, които са дали неопределени резултати при други тестове за потвърждение)

Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Всички HIV проби за сероконверсия са идентифицирани като положителни Няма погрешно положителни резултати/няма неутрализация Таблица 4. Антигенни тестове: HIV-1, HIV Ag/Ab (изисквания за откриване на антигени) Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 50 HIV-1 антиген позитивни ≥ 50 супернатанта от клетъчна култура, включваща различни подтипове HIV-1 и HIV-2 всички действително положителни проби се установяват като положителни (след неутрализация, ако е приложимо) Панели за сероконверсия ≥ 20 панела за сероконверсия/панела с нисък титър ≥40 HIV проби за ранна сероконверсия диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения всички HIV проби за сероконверсия са идентифицирани като положителни . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я

с ъ ю з L 1 7 8 / 1 5

Аналитична чувствителност Първи международен референтен реагент HIV-1 p24 антиген, код NIBSC: 90/636 Диагностична специфичност Кръводарители Кръстосана реактивност Хоспитализирани пациенти Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 ≥ 200 ≥ 50 ≤ 2 IU/ml ≥ 99,5 % след неутрализация или, ако не е наличен тест за неутрализация, след определяне статуса на пробата Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Таблица 5. Изделия с качествени и количествени NAT за РНК на HIV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение.

1. Изделията с количествени NAT за HIV, предназначени за откриване наличието на HIV в кръвта, кръвните компоненти, клетките, тъканите или органите или техните производни с цел да

се оцени доколко са подходящи за преливане, трансплантация или клетъчно прилагане, се разработват с оглед откриване както на HIV-1, така и на HIV-2.

1. Изделията с качествени NAT за HIV, различни от изделията за вирусна типизация, следва да бъдат разработени така, че да се компенсира евентуалната неуспешна NAT за HIV-1 по

отношение на определен белязан регион, като се използват два отделни белязани региона. Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Международен стандарт на СЗО за РНК на HIV-1; Международен стандарт на СЗО за РНК на HIV-2; или калибрирани референтни материали

Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. Според най-съвременните постижения L 1 7 8 / 1 6 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Чувствителност към генотип/подтип на HIV Диагностична чувствителност всички приложими генотипове/ подтипове, за предпочитане от международни референтни материали потенциални заместители на редките подтипове на HIV (трябва да се определят количествено чрез подходящи методи): супернатанти от клетъчни култури; инвитро транскрипти; плазмиди Положителни проби, които възпроизвеждат обичайните условия на потребителите (напр. без предварителен подбор на пробите) Панели за сероконверсия След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация NAT за качествено определяне: най-малко 10 проби/ генотипове или подтипове NAT за количествено определяне: серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне

Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT Според най-съвременните постижения NAT за качествено определяне: ≥ 10 панела Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 500 Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 10 положителни проби за човешки ретровируси (напр. HTLV) Според най-съвременните постижения Пренос Силноположителни за РНК на HIV; Отрицателни за РНК на HIV Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения

Откриване, свързано със статуса на наличие на антитела Положителни за РНК на HIV: anti-HIV отрицателни, anti-HIV положителни Проби преди сероконверсия (anti-HIV отрицателни) и след сероконверсия (anti-HIV положителни) Според най-съвременните постижения . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 1 7

Общ процент на грешки Слабоположителни за РНК на HIV Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за РНК на HIV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати. ≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. Характеристика на действието Тълкуване на резултатите (2) Таблица 6. Допълнителни изисквания за тестовете за самотестване за HIV-1/2 Проби (1) Тълкуване на резултати (3) от неспециалисти, отразяващо следните равнища на реактивност на резултатите: — нереактивни — реактивни — слабореактивни (4) — невалидни Диагностична чувствителност неспециалисти, за които се знае, че са с положителни резултати Диагностична специфичност неспециалисти, които не знаят статуса си Неспециалисти, които са изложени на висок риск от заразяване с инфекцията Брой неспециалисти ≥ 100 ≥ 200 ≥ 400 ≥ 200 (1) За всяка телесна течност, заявена за използване с изделието, напр. цяла кръв, урина, слюнка и др., чувствителността и специфичността на изделието за самотестване при употреба от неспециалисти се определят в

зависимост от потвърдения инфекциозен статус на пациента. (2) В проучването за тълкуване на резултатите се включва отчитане и тълкуване на резултати от тестове от най-малко 100 неспециалисти, като всеки неспециалист трябва да отчете резултати, покриващи посочения диапазон на равнища на реактивност на резултатите. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (3) Тестовете се провеждат преди проучването за тълкуване на резултатите, като по възможност се използва типът на пробата, предвиден от производителя. Тестовете могат да се извършват със симулирани проби на база на естествената матрица на съответния тип проба. (4) По-голяма част от пробите са в диапазона на слабоположителните резултати, близки до граничната стойност или LOD на теста. L 1 7 8 / 1 8 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ЧОВЕШКИЯ T-КЛЕТЪЧЕН ЛИМФОТРОПЕН ВИРУС (HTLV) Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с човешкия T-клетъчен лимфотропен вирус (HTLV). Обхват ПРИЛОЖЕНИЕ IV Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за антитела срещу HTLV I или II (anti-HTLV I/II), които не са бързи тестове. Таблица 2 се отнася за тестовете от първа линия за anti-HTLV I/II, които са бързи тестове. Таблица 3 се отнася за тестовете за потвърждение за anti-HTLV I/II. Таблица 4 се отнася за изделия с NAT за HTLV I/II. Таблица 1. Тестове от първа линия: anti-HTLV I/II Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 300 HTLV-I ≥ 100 HTLV-II включително 25 положителни пресни серумни проби „от същия ден“ (≤ 1 ден след вземането на пробата) всички действително положителни проби се установяват като положителни

Панели за сероконверсия Да се определи в зависимост от наличностите Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) (1) ≥ 5 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 (напр. RF+, от сродни вирусни инфекции, от бременни жени) диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения, ако е приложимо ≥ 99,5 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва кръводарителите за първи път. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 1 9

Таблица 2. Бързи тестове: anti-HTLV I/II Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 300 HTLV-I ≥ 100 HTLV-II всички действително положителни проби се установяват като положителни Панели за сероконверсия Да се определи в зависимост от наличностите Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) ≥ 1 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 проби от бременни жени общо ≥ 100 други проби с потенциална кръстосана реактивност (напр. RF+, от сродни инфекции) Таблица 3. Тестове за потвърждение: anti-HTLV I/II диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения, ако е приложимо ≥ 99 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане

Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 200 HTLV I ≥ 100 HTLV II Идентифициране като „потвърдено положителни“ или „неопределени“, а не като „отрицателни“ Панели за сероконверсия Да се определи в зависимост от наличностите Диагностична специфичност Кръводарители Кръстосана реактивност Хоспитализирани пациенти Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 ≥ 200 общо ≥ 50 (включително проби от бременни жени, проби, които са дали неопределени резултати при други тестове за потвърждение) диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения, ако е приложимо Няма погрешно положителни резултати L 1 7 8 / 2 0 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Таблица 4. Изделия с NAT за HTLV I/II

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение. Характеристика на действието

Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Международни референтни препарати Чувствителност към генотиповете на HTLV I и HTLV II всички приложими генотипове, за предпочитане от международни референтни материали потенциални заместители на редките генотипове на HTLV (трябва да се определят количествено чрез подходящи методи): супернатанти от клетъчни култури; инвитро транскрипти; плазмиди Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация

NAT за качествено определяне: най-малко 10 проби/ генотипове или подтипове NAT за количествено определяне: серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 500 Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 2 1

Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 10 положителни проби за човешки ретровируси (напр. HIV-1, HIV-2) Пренос Силноположителни за РНК на HTLV; отрицателни за РНК на HTLV Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Откриване, свързано със статуса на наличие на антитела Положителни за РНК на HTLV: anti- HTLV отрицателни, anti-HTLV положителни Общ процент на грешки Слабоположителни за РНК на HTLV Проби преди сероконверсия (anti-HTLV отрицателни) и след сероконверсия (anti-HTLV положителни) Според най-съвременните постижения Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за РНК на HTLV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати.

≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. L 1 7 8 / 2 2 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ВИРУСА НА ХЕПАТИТ C (HCV) ПРИЛОЖЕНИЕ V Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с вируса на хепатит C (HCV). Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за антитела срещу HCV (anti-HCV) и комбинираните тестове за антигени на HCV/антитела срещу HCV (HCV Ag/Ab), които не са бързи тестове. Обхват Таблица 2 се отнася за тестовете от първа линия за anti-HCV и HCV Ag/Ab, които са бързи тестове. Таблица 3 се отнася за тестовете за потвърждение и за допълнителните тестове за anti-HCV. Таблица 4 се отнася за антигенните тестове за HCV и за HCV Ag/Ab. Таблица 5 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за РНК на HCV. Таблица 6 се отнася за тестовете за самотестване за HCV. Таблица 1. Тестове от първа линия: anti-HCV, HCV Ag/Ab (изисквания за откриване на антитела) Характеристика на действието Проба

Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 Включително проби от различни стадии на инфекцията и представляващи различни профили на антитела Генотипове 1—4 на HCV: > 20 проби за генотип (включващи non-a подтипове на генотип 4); Генотипове 5 и 6 на HCV: > 5 проби от всеки; включително 25 положителни пресни серумни проби „от същия ден“ (≤ 1 ден след вземането на пробата) всички действително положителни проби се установяват като положителни Панели за сероконверсия ≥ 30 панела Панелите за сероконверсия на HCV за оценката на комбинираните тестове за антигени и антитела на HCV (HCV Ag/Ab) започват с един или няколко отрицателни кръвни теста и включват проби от ранната фаза на инфекцията с HCV (ядрен антиген на HCV и/или положителни за наличие на РНК на HCV, но отрицателни за наличие на anti-HCV). диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Тестовете HCV Ag/Ab показват по-висока чувствителност в ранната фаза на инфекцията с HCV в сравнение с тестовете за откриване само на антитела срещу HCV.

. . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 2 3

Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) (1) ≥ 5 000 ≥ 99,5 % Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 (напр. RF+, от сродни вирусни инфекции, от бременни жени) (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва кръводарителите за първи път. Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Таблица 2. Бързи тестове: anti-HCV, HCV Ag/Ab (изисквания за откриване на антитела) Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 Включително проби от различни стадии на инфекцията и представляващи различни профили на антитела. Генотипове 1—4 на HCV: > 20 проби за генотип (включващи non-a подтипове на генотип 4); Генотипове 5 и 6 на HCV: > 5 проби от всеки;

Панели за сероконверсия ≥ 30 панела Панелите за сероконверсия на HCV за оценката на комбинираните тестове за антигени и антитела на HCV (HCV Ag/Ab) започват с един или няколко отрицателни кръвни теста и включват проби от ранната фаза на инфекцията с HCV (ядрен антиген на HCV и/или положителни за наличие на РНК на HCV, но отрицателни за наличие на anti-HCV). Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път)1 ≥ 1 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 проби от бременни жени общо ≥ 100 други проби с потенциална кръстосана реактивност (напр. RF+, от сродни инфекции) всички действително положителни проби се установяват като положителни диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Тестовете HCV Ag/Ab показват по-висока чувствителност в ранната фаза на инфекцията с HCV в сравнение с тестовете за откриване само на антитела срещу HCV. ≥ 99 %

Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива L 1 7 8 / 2 4 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Таблица 3. Тестове за потвърждение и допълнителни тестове: anti-HCV Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 300 Включително проби от различни стадии на инфекцията и представляващи различни профили на антитела. Генотипове 1—4 на HCV: > 20 проби (включващи non-a подтипове на генотип 4); Генотип 5 на HCV: > 5 проби; Генотип 6 на HCV: ако е наличен Панели за сероконверсия ≥ 15 панела за сероконверсия/панела с нисък титър Диагностична специфичност Кръводарители Хоспитализирани пациенти ≥ 200 ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 50 (включително проби от бременни жени, проби, които са дали неопределени резултати при други тестове за потвърждение) идентифициране като „потвърдено положителни“ или „неопределени“, а не като „отрицателни“ диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Няма погрешно положителни резултати/няма неутрализация

Таблица 4. Антигенни тестове: Антиген на HCV, HCV Ag/Ab (изисквания за откриване на антигени) Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 25 ядрен антиген на HCV и/или положителни за наличие на РНК на HCV, но отрицателни за наличие на anti-HCV проби, включващи генотипове 1—6 на HCV (ако даден генотип не е наличен, се представя обосновка) всички действително положителни проби се установяват като положителни Панели за сероконверсия ≥ 20 панела за сероконверсия/панела с нисък титър Панелите за сероконверсия на HCV за оценката на комбинираните тестове за антигени и антитела на HCV започват с един или няколко отрицателни кръвни теста и включват проби от ранната фаза на инфекцията с HCV (ядрен антиген на HCV и/или положителни за наличие на РНК на HCV, но отрицателни за наличие на anti-HCV). диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Комбинираните тестове за антигени и антитела на HCV показват по-висока чувствителност в ранната фаза на инфекцията с HCV в сравнение с тестовете за откриване само на антитела срещу HCV.

. . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 2 5

Аналитична чувствителност Международен стандарт на СЗО за ядро на HCV (PEI 129096/12) Серия от разреждания Диагностична специфичност Кръводарители Кръстосана реактивност Хоспитализирани пациенти Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 ≥ 200 ≥ 50 ≥ 99,5 % след неутрализация или, ако не е наличен тест за неутрализация, след определяне статуса на пробата Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Таблица 5. Изделия с качествени и количествени NAT за РНК на HCV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение. Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Международен стандарт на СЗО за РНК на HCV (или калибрирани референтни материали) Според най-съвременните постижения Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация

L 1 7 8 / 2 6 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Чувствителност към генотипа на HCV Диагностична чувствителност всички приложими генотипове/ подтипове, за предпочитане от международни референтни материали потенциални заместители на редките генотипове на HCV (трябва да се определят количествено чрез подходящи методи): инвитро транскрипти; плазмиди Положителни проби, които възпроизвеждат обичайните условия на потребителите (напр. без предварителен подбор на пробите) Панели за сероконверсия NAT за качествено определяне: ≥ 10 проби/генотипове или подтипове NAT за количествено определяне: серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 Според най-съвременните постижения Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT NAT за качествено определяне: ≥ 10 панела Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност

Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 500 Според най-съвременните постижения Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност > 10 положителни проби за човешки флавивирус (напр. HGV, YFV) NAT за количествено определяне: ≥ 100 Пренос Силноположителни за РНК на HCV; отрицателни за РНК на HCV Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Откриване, свързано със статуса на наличие на антитела Положителни за РНК на HCV: anti-HCV отрицателни, anti-HCV положителни Проби преди сероконверсия (anti-HCV отрицателни) и след сероконверсия (anti-HCV положителни) Според най-съвременните постижения Общ процент на грешки Слабоположителни за РНК на HCV Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за РНК на HCV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати.

≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 2 7

Характеристика на действието Тълкуване на резултатите (2) Таблица 6. Допълнителни изисквания за тестовете за самотестване за HCV Проби (1) Тълкуване на резултати (3) от неспециалисти, отразяващо следните равнища на реактивност на резултатите: — нереактивни — реактивни — слабореактивни (4) — невалидни Диагностична чувствителност неспециалисти, за които се знае, че са с положителни резултати Диагностична специфичност неспециалисти, които не знаят статуса си неспециалисти, които са изложени на висок риск от заразяване с инфекцията Брой неспециалисти ≥ 100 ≥ 200 ≥ 400 ≥ 200 (1) За всяка телесна течност, заявена за използване с изделието, напр. цяла кръв, урина, слюнка и др., чувствителността и специфичността на изделието за самотестване при употреба от неспециалисти се определят в зависимост от потвърдения инфекциозен статус на пациента. (2) В проучването за тълкуване на резултатите се включва отчитане и тълкуване на резултати от тестове от най-малко 100 неспециалисти, като всеки неспециалист трябва да отчете резултати, покриващи посочения

диапазон на равнища на реактивност на резултатите. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (3) Тестовете се провеждат преди проучването за тълкуване на резултатите, като по възможност се използва типът на пробата, предвиден от производителя. Тестовете могат да се извършват със симулирани проби на база на естествената матрица на съответния тип проба. (4) По-голяма част от пробите са в диапазона на слабоположителните резултати, близки до граничната стойност или LOD на теста. L 1 7 8 / 2 8 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ВИРУСА НА ХЕПАТИТ B (HBV) ПРИЛОЖЕНИЕ VI Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с вируса на хепатит B (HBV). Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за повърхностния антиген на хепатит В (HBsAg) и за антитела срещу ядрения антиген на хепатит В (anti-HBc), които не са бързи тестове. Обхват Таблица 2 се отнася за тестовете от първа линия за HBsAg и anti-HBc, които са бързи тестове. Таблица 3 се отнася за тестовете за потвърждение за HBsAg. Таблица 4 се отнася за тестовете за маркери на вируса на хепатит В: антитела срещу повърхностния антиген на хепатит В (anti-HBs), IgM антитяло срещу ядрения антиген на хепатит В (anti- HBc IgM), антитела срещу антигена на хепатит Be (anti-HBe) и антиген на хепатит Be (HBeAg). Таблица 5 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT изделия за дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК) на HBV.

Таблица 6 се отнася за тестовете за самотестване за HBV. Таблица 1. Тестове от първа линия: HBsAg, anti-HBc Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 Аnti-HBc включително оценка на различни маркери за HBV HBsAg: включително различни генотипове/подтипове/ мутанти на HBV anti-HBc или HBsAg: включително 25 положителни пресни серумни проби „от същия ден“ (≤ 1 ден след вземането на пробата) Цялостното действие трябва да е поне равностойно на действието на сравнителното изделие Панели за сероконверсия Тестове за HBsAg: ≥ 30 панела Тестове за anti-HBc: да се определи в зависимост от наличностите Аналитична чувствителност Трети международен стандарт на СЗО за HBsAg (подтипове ayw1/adw2, генотип B4 на HBV, код NIBSC: 12/226) диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения (за anti-HBc изискването трябва да е изпълнено, ако същото е приложимо) За тестовете за HBsAg: < 0,130 IU/ml

. . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 2 9

Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) (1) ≥ 5 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 (напр. RF+, от сродни вирусни инфекции, от бременни жени) ≥ 99,5 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва кръводарителите за първи път. Таблица 2. Бързи тестове: HBsAg, anti-HBc Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 включително оценка на различни маркери за HBV включително различни генотипове/подтипове/мутанти на HBV Цялостното действие трябва да е поне равностойно на действието на сравнителното изделие Панели за сероконверсия Тестове за HBsAg: ≥ 30 панела Тестове за anti-HBc: да се определи в зависимост от наличностите

Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения (за anti-HBc изискването трябва да е изпълнено, ако същото е приложимо) Диагностична специфичност Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) ≥ 1 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 проби от бременни жени общо ≥ 100 други проби с потенциална кръстосана реактивност (напр. RF+, от сродни инфекции) Тестове за HBsAg: ≥ 99 % Тестове за anti-HBc: ≥ 99 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива L 1 7 8 / 3 0 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Таблица 3. Тестове за потвърждение: HBsAg Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 300 Включително проби от различни стадии на инфекцията Включително 20 „силноположителни“ проби (> 26 IU/ ml); 20 проби в диапазона на граничната стойност Правилно идентифициране като положителни (или неопределени), а не като отрицателни Панели за сероконверсия ≥ 15 панела за сероконверсия/панела с нисък титър Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Аналитична чувствителност Трети международен стандарт на СЗО за HBsAg (подтипове ayw1/adw2, генотип B4 на HBV, код NIBSC: 12/226 Диагностична специфичност Отрицателни проби ≥ 10 погрешно положителни, ако са налични от оценката на действието на теста от първа линия Няма погрешно положителни резултати/няма неутрализация Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 50 Таблица 4. Тестове за маркери за HBV: anti-HBs, anti-HBс IgM, anti-Hbe, AgHBe

Характеристика на действието anti-HBs anti-HBc IgM anti-HBe HBeAg Критерии за приемане Диагностична чувствително- ст Положителни проби ≥ 100 ваксинирани лица ≥ 100 лица, заразени по естествен път ≥ 200 Включително проби от различни стадии на инфекцията (остра/хронична и т.н.) ≥ 200 Включително проби от различни стадии на инфекцията (остра/хронична и т.н.) ≥ 200 Включително проби от различни стадии на инфекцията (остра/хронична и т.н.) ≥ 98 % (за anti-HBc IgM: приложимо само за проби от стадия на остра инфекция) Панели за сероконвер- сия 10 anti-HBs панела за сероконверсия или серии за проследяване В зависимост от наличностите В зависимост от наличностите В зависимост от наличностите Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения (за anti-HBc IgM, anti-HBe, HBeAg изискването трябва да е изпълнено, ако същото е приложимо) . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 3 1

Стандарти Аналитична чувствително- ст Втори международен стандарт на СЗО за човешки имуноглобулин срещу повърхностния антиген на хепатит B (anti-HBs); код NIBSC: 07/164 Първи международен стандарт на СЗО за антитела срещу антиген e на вируса на хепатит В (anti-HBe), код PEI: 129095/12 Първи международен стандарт на СЗО за антиген e на вируса на хепатит В (HBeAg); код PEI: 129097/12 HBe anti-HBs: < 10 mIU/ml Диагностична специфичност Отрицателни проби ≥ 500 Включващи клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 200 кръводарявания ≥ 200 клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 200 кръводарявания ≥ 200 клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 200 кръводарявания ≥ 200 клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 98 % Таблица 5. Изделия с качествени и количествени NAT за ДНК на HBV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение. Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Международен стандарт на СЗО за ДНК на HBV (или калибрирани референтни материали) Според най-съвременните постижения Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1).

Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация L 1 7 8 / 3 2 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Чувствителност към генотипа на HBV Международен референтен панел на СЗО за ДНК на HBV (генотипове на HBV) всички приложими генотипове/ подтипове, за предпочитане от международни референтни материали потенциални заместители на редките генотипове на HBV (трябва да се определят количествено чрез подходящи методи): плазмиди; синтетична ДНК NAT за качествено определяне: най-малко 10 проби/генотипове или подтипове NAT за количествено определяне: серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне Според най-съвременните постижения Диагностична чувствителност Положителни проби, които възпроизвеждат обичайните условия на потребителите (без предварителен подбор на пробите) Панели за сероконверсия NAT за количествено определяне: ≥ 100 Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT Според най-съвременните постижения NAT за качествено определяне: ≥ 10 панела Паралелно с това се генерират съпоставителни резултати с друга система за тестване с NAT

Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 500 NAT за количествено определяне: ≥ 100 Кръстосана реактивност Пренос Проби с потенциална кръстосана реактивност Силноположителни за ДНК на HBV; отрицателни за ДНК на HBV Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Откриване, свързано със статуса на наличие на антитела Положителни за ДНК на HBV: anti-HBV отрицателни, anti-HBV положителни Проби преди сероконверсия (anti-HBV отрицателни) и след сероконверсия (anti-HBV положителни) Според най-съвременните постижения Общ процент на грешки Слабоположителни за ДНК на HBV Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за ДНК на HBV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати.

≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 3 3

Характеристика на действието Тълкуване на резултатите (2) Таблица 6. Допълнителни изисквания за тестовете за самотестване за HBV Проби (1) Тълкуване на резултати (3) от неспециалисти, отразяващо следните равнища на реактивност на резултатите: — нереактивни — реактивни — слабореактивни (4) — невалидни Диагностична чувствителност неспециалисти, за които се знае, че са с положителни резултати Диагностична специфичност неспециалисти, които не знаят статуса си неспециалисти, които са изложени на висок риск от заразяване с инфекцията Брой неспециалисти ≥ 100 ≥ 200 ≥ 400 ≥ 200 (1) За всяка телесна течност, заявена за използване с изделието, напр. цяла кръв, урина, слюнка и др., чувствителността и специфичността на изделието за самотестване при употреба от неспециалисти се определят в зависимост от потвърдения инфекциозен статус на пациента. (2) В проучването за тълкуване на резултатите се включва отчитане и тълкуване на резултати от тестове от най-малко 100 неспециалисти, като всеки неспециалист трябва да отчете резултати, покриващи посочения

диапазон на равнища на реактивност на резултатите. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (3) Тестовете се провеждат преди проучването за тълкуване на резултатите, като по възможност се използва типът на пробата, предвиден от производителя. Тестовете могат да се извършват със симулирани проби на база на естествената матрица на съответния тип проба. (4) По-голяма част от пробите са в диапазона на слабоположителните резултати, близки до граничната стойност или LOD на теста. L 1 7 8 / 3 4 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ВИРУСА НА ХЕПАТИТ D (HDV) ПРИЛОЖЕНИЕ VII Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с вируса на хепатит D (HDV). Таблица 1 се отнася за изделията, предназначени за откриване (включително потвърждаване) или количествено определяне на следните маркери на вируса на хепатит D: антитела срещу вируса на хепатит D (anti-HDV), IgM антитела срещу вируса на хепатит D (anti-HDV IgM), антиген делта. Таблица 2 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за РНК на HDV. Обхват Таблица 1. Тестове за маркери на HDV: anti-HDV, anti-HDV IgM, антиген делта Характеристика на действието anti-HDV anti-HDV IgM Антиген делта Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби Диагностична специфичност Отрицателни проби ≥ 100 Уточняващи маркери за коинфекция с HBV ≥ 50 Уточняващи маркери за коинфекция с HBV

≥ 10 Уточняващи маркери за коинфекция с HBV ≥ 200 Включващи клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 200 Включващи клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 200 Включващи клинични проби ≥ 50 потенциално интерферентни проби ≥ 98 % ≥ 98 % Таблица 2. Изделия с качествени и количествени NAT за РНК на HDV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 3 5

Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Първи международен стандарт на СЗО за РНК на HDV, код PEI: 7657/12 Чувствителност към генотипа на HDV всички приложими генотипове/ подтипове, за предпочитане от международни референтни материали потенциални заместители на редките генотипове на HDV (трябва да се определят количествено чрез подходящи методи): плазмиди; синтетична РНК Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация

NAT за количествено определяне: серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 100 Според най-съвременните постижения Кръстосана реактивност Пренос Проби с потенциална кръстосана реактивност Силноположителни за РНК на HDV; отрицателни за РНК на HDV Общ процент на грешки Слабоположителни за РНК на HDV NAT за количествено определяне: ≥ 100 Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за РНК на HDV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати. Според най-съвременните постижения

Според най-съвременните постижения ≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. L 1 7 8 / 3 6 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ НА МАРКЕРИ НА ВАРИАНТ НА БОЛЕСТТА НА КРОЙЦФЕЛД-ЯКОБ (vCJD) ПРИЛОЖЕНИЕ VIII Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване на маркери на вариант на болестта на Кройцфелд-Якоб (vCJD). Таблица 1 се отнася за изделията, предназначени за откриване на маркери на vCJD. Обхват Таблица 1. Изделия за откриване на маркери на vCJD Характеристика на действието Материал Брой проби Критерии за приемане Аналитична чувствителност Проби от мозък, засегнат от vCJD, инжектирани в човешка плазма (референтен номер на СЗО NHBY0/0003) ≥ 24 репликата от всяко от трите разреждания на материала с номер на СЗО NHBY0/0003 (1 × 104, 1 × 105, 1 × 106) Проби от далак, засегнат от vCJD, инжектирани в човешка плазма (10 % хомогенат от далак — референтен номер по NIBSC NHSY0/0009) ≥ 24 репликата от всяко от трите разреждания на материала с номер по NIBSC NHSY0/0009 (1 × 10, 1 × 102, 1 × 103) 23 от 24-те репликата, определени при 1 × 104 23 от 24-те репликата, определени при 1 × 10

Диагностична чувствителност Проби от подходящи животински модели Възможно най-много проби в разумни граници и според наличието, но ≥ 10 проби 90 % Проби от хора с клинично проявен vCJD Възможно най-много проби в разумни граници и според 90 % наличието, но ≥ 10 проби Само в случаите, когато няма налични 10 проби: — тестват се между 6 и 9 проби; — тестват се всички налични проби. най-много един погрешно отрицателен резултат Аналитична специфичност Диагностична специфичност Проби с потенциална кръстосана реактивност Проби от нормална човешка плазма от район с ниска степен на излагане на спонгиформна енцефалопатия по говедата (СЕГ) ≥ 100 ≥ 5 000 ≥ 99,5 % . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 3 7

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ЦИТОМЕГАЛОВИРУС (CMV) ПРИЛОЖЕНИЕ IX Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с цитомегаловирус (CMV). Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за общи антитела срещу CMV (общи anti-CMV) и IgG антитела срещу CMV (anti-CMV IgG). Таблица 2 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за ДНК на CMV. Обхват Таблица 1. Тестове от първа линия: общи anti-CMV и anti-CMV IgG Характеристика на действието Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 включително проби от скорошна и минала инфекция с CMV, положителни проби с нисък и висок титър Панели за сероконверсия Да се тестват в зависимост от наличностите чувствителност ≥ 99 % за потвърдима минала инфекция (1); общата чувствителност, включително скорошна инфекция (2), трябва да е еквивалентна на чувствителността на сравнителното изделие

Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Аналитична чувствителност Стандарти Диагностична специфичност Отрицателни проби Международен стандарт на СЗО за anti- CMV IgG (код PEI: 136616/17) При определяне на титри и на количествени величини ≥ 400 (3) отрицателни за CMV проби от дарители, които не са подлежали на подбор, при сравнение с резултатите от друг тест за CMV. ≥ 99 % Хоспитализирани пациенти (4) ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана (5) реактивност общо ≥ 100 (напр. RF+, сродни вируси или други инфекциозни агенти, бременни жени и др.) Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Включително тестване на други показатели за CMV (напр. CMV-IgM, авидност, имуноблот) или предишни/последващи проби за проследяване на резултатите от тестовете с цел оценка на действителния статус на пробата. (2) Допълнително тестване за потвърждаване на скорошна инфекция с CMV (първична или повторна инфекция): напр. CMV-IgM, IgG авидност, имуноблот анализ. (3) Съответства на първоначален брой 1000 дарители при предполагаемо равнище на разпространение на CMV 60 %. (4) Включително реципиенти преди трансплантация. (5) Включително сродните ß-херпесни вируси (HHV-6, HHV-7).

L 1 7 8 / 3 8 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Таблица 2. Изделия с качествени и количествени NAT за ДНК на CMV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение.

Характеристика на действието Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Аналитична чувствителност Първи международен стандарт на СЗО за ДНК на човешки CMV (09/162; 5 000 000 IU/флакон) (или калибрирани референтни материали) Диагностична чувствителност Чувствителност към щама на CMV Проби от пациенти, определени като положителни за ДНК на CMV чрез сравнително изделие Като потенциални заместители е възможно да послужат серии от разреждания на положителни за CMV клетъчни култури Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация

NAT за качествено определяне: ≥ 100 NAT за количествено определяне: ≥ 100 серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Проби от кръводарители NAT за качествено определяне: ≥ 500 Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 3 9

Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност Пренос Силноположителни за ДНК на CMV; отрицателни за ДНК на CMV Общ процент на грешки Слабоположителни за ДНК на CMV общо ≥ 20 проби Включително проби от хора, положителни за сродни човешки херпесни вируси, напр. EBV, HHV6, VZV Като потенциални заместители е възможно да послужат положителни за херпесни вируси клетъчни култури Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за ДНК на CMV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати. ≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“.

L 1 7 8 / 4 0 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ВИРУСА НА ЕПЩАЙН-БАР (EBV) ПРИЛОЖЕНИЕ X Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с вируса на Епщайн-Бар (EBV). Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за IgG антитела срещу вирусния капсиден антиген на EBV (anti-EBV VCA IgG). Таблица 2 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за ДНК на EBV. Обхват Таблица 1: Тестове от първа линия: anti-EBV VCA IgG Характеристика на действието Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 включително проби от скорошна и минала инфекция с EBV, положителни проби с нисък и висок титър ≥ 99 % за потвърдима минала инфекция (1); общата чувствителност, включително скорошна инфекция (2), трябва да е еквивалентна на чувствителността на сравнителното изделие Панели за сероконверсия Да се тестват в зависимост от наличностите

диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най-съвременните постижения Аналитична чувствителност Стандарти Диагностична специфичност Отрицателни проби Международни референтни реактиви, в зависимост от наличностите ≥ 200 (3) отрицателни резултата за EBV от дарители, които не са подлежали на подбор, при сравнение с резултатите от друго изделие за EBV. ≥ 99 % Хоспитализирани пациенти (4) ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 (напр. RF+, сродни вируси или други инфекциозни агенти, бременни жени и др.) Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Включително тестване на други показатели за EBV (напр. VCA-IgM, EBNA-1 IgG, имуноблот) или предишни/последващи проби за проследяване на резултатите от тестовете с цел оценка на действителния статус на пробата. (2) Допълнително тестване за потвърждаване на скорошна инфекция с EBV: напр. VCA-IgM, IgG авидност, имуноблот анализ. (3) При предполагаемо равнище на разпространение на EBV 80 % съответства на първоначален брой 1000 дарители. (4) Включително реципиенти преди трансплантация.

. . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 4 1

Таблица 2. Изделия с качествени и количествени NAT за ДНК на EBV

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение.

Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Характеристика на действието Аналитична чувствителност Първи международен стандарт на СЗО за ДНК на човешки EBV (09/260; 5 000 000 IU/флакон) (или калибрирани референтни материали) Според най-съвременните постижения Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Количествени NAT: определяне на долна и горна граница на количествено определяне, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Възпроизводимост при различни равнища на концентрация NAT за качествено определяне: ≥ 100 NAT за количествено определяне: ≥ 100 серия от разреждания за доказване на ефективността на количественото определяне

Диагностична чувствителност Чувствителност към щама на EBV Проби от пациенти, определени като положителни за ДНК на EBV чрез сравнително изделие Серии от разреждания на положителни за EBV клетъчни култури е възможно да послужат като потенциални заместители Диагностична специфичност Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност Отрицателни проби NAT за качествено определяне: ≥ 500 Според най-съвременните постижения NAT за количествено определяне: ≥ 100 общо ≥ 20 проби Включително проби от хора, положителни за сродни човешки херпесни вируси, напр. CMV, HHV6, VZV Като потенциални заместители е възможно да послужат положителни за херпесни вируси клетъчни култури Според най-съвременните постижения L 1 7 8 / 4 2 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Пренос Силноположителни за ДНК на EBV; отрицателни за ДНК на EBV Общ процент на грешки Слабоположителни за ДНК на EBV Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно. Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за ДНК на EBV. Тези проби съдържат вирусна концентрация, еквивалентна на три пъти вирусната концентрация, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати. Според най-съвременните постижения ≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 4 3

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С TREPONEMA PALLIDUM ПРИЛОЖЕНИЕ XI Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване на маркери на Treponema pallidum (T. pallidum). Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за антитела срещу T. pallidum (anti-T. pallidum). Таблица 2 се отнася за анализите за потвърждение и за допълнителните анализи за anti-T. pallidum. Таблица 1. Тестове от първа линия: anti-T. pallidum Обхват Характеристика на действието Диагностична чувствителност Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Положителни проби Общо ≥ 200 положителни проби, от различни стадии на инфекцията, в зависимост от наличностите, включително силноположителни и слабоположителни проби, идентифицирани като положителни чрез поне две различни серологични изследвания (едното от които е ензимно-свързан имуносорбентен анализ) за различни антитела срещу T.pallidum

обща чувствителност ≥ 99,5 % Панели за сероконверсия Поне 1 панел за сероконверсия, ≥ 1, ако е възможно, включително отделни проби от ранната фаза на инфекцията Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на съвременните постижения. Стандарти Международни стандарти на СЗО код NIBSC: 05/132, в зависимост от наличностите Кръводарители без подбор (включително кръводарители за първи път) (1) ≥ 5 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 ≥ 99,5 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 включително следните проби: положителни за Borrelia burgdorferi sensu lato, потвърдени с имуноблот на IgG; положителни за anti-HIV; RF+; други сродни микробни/инфекциозни агенти; пациенти със системен лупус еритематодес (СЛЕ); положителни за антифосфолипидни антитела; бременни жени и др. (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва

кръводарителите за първи път. L 1 7 8 / 4 4 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Таблица 2. Тестове за потвърждение и допълнителни тестове: anti-T. pallidum Характеристика на действието Диагностична чувствителност Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемливост Положителни проби ≥ 300 положителни проби от различни стадии на инфекцията (ранен първичен сифилис, вторичен стадий и по време на късен сифилис), включително силноположителни проби, 50 слабоположителни проби, чрез поне две различни серологични изследвания (единото от които е ензимно- свързан имуносорбентен анализ) за различни антитела срещу T. pallidum 99 % идентифициране като „потвърдено положителни“ или „неопределени“ Панели за сероконверсия Поне 1 панел за сероконверсия, ≥ 1, ако е възможно, включително отделни проби от ранната фаза на инфекцията Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най- съвременните постижения Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Стандарти Кръводарители Клинични проби: Международни стандарти на СЗО код NIBSC: 05/132 ≥ 200 ≥ 200

Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 50, включително проби от бременни жени и проби, които са дали неопределени резултати при други тестове за потвърждение ≥ 99 %; Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 4 5

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С TRYPANOSOMA CRUZI ПРИЛОЖЕНИЕ XII Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с Trypanosoma cruzi (T. cruzi) Обхват Таблица 1 се отнася за тестовете от първа линия за антитела срещу T. cruzi (anti-T. cruzi). Таблица 2 се отнася за анализите за потвърждение и за допълнителните анализи за anti-T. cruzi. Таблица 3 се отнася за изделията с качествени и количествени NAT за ДНК на T. cruzi. Таблица 1. Тестове от първа линия: anti-T. cruzi Характеристика на действието Диагностична чувствителност Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Положителни проби ≥ 400 положителни проби, включително силноположителни, потвърдени с поне две различни серологични изследвания за различни антитела срещу T. cruzi. От тези 400 проби ≥ 25 са положителни за паразити, което е потвърдено чрез директно откриване.

обща чувствителност 99,5 % Панели за сероконверсия Да се определи в зависимост от наличностите Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Стандарти Международни стандарти на СЗО код NIBSC: 09/186 код NIBSC: 09/188 Дарители, които не са подлежали на подбор (включително кръводарителите за първи път) (1) ≥ 5 000 Хоспитализирани пациенти ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 включително следните проби: положителни за anti-Toxoplasma gondii; поне 5 проби, положителни за anti-Leishmania; RF+; сродни микробни агенти или други инфекциозни агенти; пациенти със СЛЕ; пациенти с положителни резултати за антифосфолипидни антитела; бременни жени и др. Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на най- съвременните постижения ≥ 99,5 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива (1) Популациите на изследваните кръводарители са най-малко от два центъра за кръводаряване, като пробите се състоят от последователни кръводарявания, които не са избрани по начин, който да изключва

кръводарителите за първи път. L 1 7 8 / 4 6 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Таблица 2. Тестове за потвърждение и допълнителни тестове: anti-T. cruzi Характеристика на действието Диагностична чувствителност Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемливост Положителни проби ≥ 300 положителни проби, включително силноположителни, потвърдени с поне две различни серологични изследвания за различни антитела срещу T. cruzi. От тези 300 проби ≥ 25 са положителни за паразити, което е потвърдено чрез директно откриване. ≥ 99 % идентифициране като „потвърдено положителни“ или „неопределени“ Панели за сероконверсия Ако са налични Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Стандарти Международни стандарти на СЗО код NIBSC: 09/186 код NIBSC: 09/188 Отрицателни проби Клинични проби: ≥ 200 ≥ 200 Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 50, включително проби от бременни жени и проби, които са дали неопределени резултати при други тестове за потвърждение Диагностичната чувствителност по време на сероконверсия отговаря на съвременните постижения, ако е приложимо

≥ 99 % Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Таблица 3: Изделия с NAT за ДНК на T. cruzi

1. Що се отнася до изделията за амплификация на белязаната секвенция, контролът за функционалност за всяка проба (вътрешен контрол) отговаря на най-съвременните постижения. Този

контрол се използва по възможност в продължение на целия процес — т.е. екстракция, амплификация/хибридизация, откриване.

1. Откриването на генотипа и/или на подтипа се доказва чрез подходящо валидиране на дизайна на праймерите или сондите и освен това се валидира чрез тестване на проби от характерни

генотипове.

1. Потенциалната кръстосана реактивност на небелязаните секвенции на нуклеинови киселини се анализира чрез валидиране на дизайна на подходящи праймери или сонди и освен това се

валидира чрез тестване на избрани проби.

1. Резултатите от изделията с количествени NAT са проследими до международните стандарти или еталонираните референтни материали, ако има такива, и са изразени в международните

единици, използвани във въпросната област на приложение. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 4 7

Характеристика на действието Аналитична чувствителност Проби Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Характеризиран вътрешен референтен препарат (ако не са налични международни референтни материали) Чувствителността на NAT и LOD на NAT се валидират чрез серии от разреждания на референтни материали, тестване на репликати (минимум 24) при различни концентрации на аналита, включително на концентрации с преход от положителни към отрицателни резултати при съответния анализ с NAT изделие. След извършването на статистически анализ (напр. Probit) LOD се изразява като гранична стойност при 95 % положителни резултати (IU/ml) (1). Според най-съвременните постижения Диагностична чувствителност: различни щамове/изолати на T. cruzi Проби от пациенти от различни региони, определени като положителни за ДНК на T. cruzi чрез сравнително изделие; варианти на секвенцията ≥ 100 Серии от разреждания на положителни за T. cruzi клетъчни култури (изолати) или положителни за T. cruzi материали от животински модели е възможно да послужат като потенциални заместители

Според най-съвременните постижения Диагностична специфичност Отрицателни проби ≥ 100 Според най-съвременните постижения Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност Пренос Общ процент на грешки ≥ 10 проби от хора, положителни за други паразити, напр. видовете Plasmodium, Trypanosoma brucei. Положителни клетъчни култури е възможно да послужат като потенциални заместители Провеждат се минимум пет серии по време на проучванията за устойчивост, като се редуват силноположителни и силноотрицателни проби. Титрите на T. cruzi на силноположителните проби са представителни за високите титри на T. cruzi, които се появяват спонтанно. Според най-съвременните постижения Според най-съвременните постижения Тестват се ≥ 100 слабоположителни проби за ДНК на T. cruzi. Тези проби съдържат концентрация на T. cruzi, еквивалентна на три пъти концентрацията на T. cruzi, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати. ≥ 99 % положителни (1) Препратка: Европейска фармакопея 9.0, 2.6.21 „Техники за амплификация на нуклеинови киселини“, „Валидиране“.

L 1 7 8 / 4 8 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

ОБЩИ СПЕЦИФИКАЦИИ ЗА ИЗДЕЛИЯТА, ПРЕДНАЗНАЧЕНИ ЗА ОТКРИВАНЕ ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА МАРКЕРИ ЗА ИНФЕКЦИЯ С ТЕЖЪК ОСТЪР РЕСПИРАТОРЕН СИНДРОМ КОРОНАВИРУС 2 ПРИЛОЖЕНИЕ XIII Това приложение се отнася за изделията, предназначени за откриване или количествено определяне на маркери за инфекция с коронавирус на тежкия остър респираторен синдром, клейд 2 (SARS-CoV-2). Таблица 1 се отнася за следните тестове от първа линия (включително за бързите тестове) за антитела срещу SARS-CoV-2 (anti-SARS-CoV-2): общи антитела, само IgG, IgG в комбинация с IgM и/или IgA. Таблица 2 се отнася за тестовете от първа линия (включително за бързите тестове) за откриване на anti-SARS-CoV-2 IgM и/или IgA. Обхват Таблица 3 се отнася за тестовете за потвърждение или за допълнителните тестове за anti-SARS-CoV-2. Таблица 4 се отнася за антигенните тестове за SARS-CoV-2, включително за бързите антигенни тестове. Таблица 5 се отнася за тестовете с NAT за РНК на SARS-CoV-2. Таблица 6 се отнася за антигенните тестове за самотестване за SARS-CoV-2, които вече са преминали през оценка на действието за професионална употреба.

Таблица 7 се отнася за тестовете за самотестване за антитела срещу SARS-CoV-2, които вече са преминали през оценка на действието за професионална употреба. Таблица 1: Тестове от първа линия (включително бързи тестове) за anti-SARS-CoV-2: общи антитела, само IgG, IgG в комбинация (1) с IgM и/или IgA Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 400 включително проби от фазата на ранна инфекция и след сероконверсия (2) (през първите 21 дни и 21 дни след появата на симптомите); включително проби от лица с асимптомно или със субклинично протичане и с лека симптоматика (на амбулаторно лечение); включително проби с ниски и високи титри; включително проби от ваксинирани лица, когато е уместно (3); отчитане на генетичните варианти чувствителност ≥ 90% (4) за проби, взети > 21 дни след появата на симптомите (5); общата чувствителност, включително на етап ранна инфекция (6), трябва да е най- малкото еквивалентна на чувствителността на сравнителното изделие

Панели за сероконверсия Ако са налични Чувствителност за сероконверсия, сравнима с чувствителността на други изделия с маркировка „СЕ“ . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 4 9

Аналитична чувствителност Референтни препарати Международен стандарт (МС) на СЗО за борба със SARS-CoV-2 (код NIBSC: 20/136); Международен референтен панел (RP) на СЗО за anti-SARS-CoV-2 антитела (кодове NIBSC: 20/140, 20/142, 20/144, 20/148, 20/150) МС: за определяне на титри/получаване на количествени (7) резултати; RP: всички тестове за антитела Диагностична специфичност Отрицателни проби (8) ≥ 400 проби от неинфектирани и неваксинирани лица (9) специфичност > 99 % (10) ≥ 200 хоспитализирани пациенти (без инфекция със SARS-CoV-2) Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 включително RF+, бременни жени, проби с антитела срещу ендемични човешки коронавируси 229E, OC43, NL63, HKU1 и други патогени на респираторни заболявания като грип A, B, RSV и др. (1) Твърдение за действието на комбинирания общ резултат; за изделия с отделни твърдения за IgM и/или IgA, вж. таблица 2. (2) Предоставя се подробна информация за периода от време между вземането на пробата и появата на симптомите (или времето на заразяване, ако има такова). (3) Производителят представя обосновка за пригодността и времето за оценка на чувствителността за съответните антитела при ваксинираните лица. (4) Въз основа на потвърден положителен резултат за SARS-CoV-2, получен с NAT. (5) Твърденията за чувствителност се уточняват в зависимост от времето между вземането на пробата след появата на симптоми или поставянето на първоначалната диагноза с PCR и теста. (6) Маркировка „CE“ съгласно Регламент (ЕС) 2017/746 като изделия от клас D, ако има такава. (7) Това се отнася за количествените тестове, ако те са и тестове от първа линия. (8) Отрицателните проби са от лица без анамнеза за инфекция със SARS-CoV-2 (ако има такива преди пандемията). (9) Лица, които са ваксинирани срещу антиген, различен от използвания в изделието, могат да бъдат включени, ако е подходящо. (10) Погрешно положителните резултати се изясняват чрез повторно тестване с други серологични тестове за SARS-CoV-2, ако е необходимо с различен дизайн на теста и антигенно покритие в сравнение с

първоначалния тест, и/или чрез тестване за потвърждение. Таблица 2: Тестове от първа линия (включително бързи тестове) за anti-SARS-CoV-2: откриване на IgM и/или IgA Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥ 200 (1) Проби (2), значителна част от които са от ранната фаза на инфекцията (в рамките на 21 дни след появата на симптомите), в сравнение с пробите след сероконверсия (> 21 дни след появата на симптомите); включително проби от лица с асимптомно, субклинично протичане с лека симптоматика (на амбулаторно лечение); включително току-що (3) ваксинирани лица, ако е необходимо; отчитане на генетичните варианти чувствителност ≥ 80 % (4) за проби, взети през първите 21 дни след появата на симптомите (5); общата чувствителност трябва да е най- малкото еквивалентна на чувствителността на сравнителното изделие (6) от същия тип (т.е. за IgM и/или IgA) L 1 7 8 / 5 0 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к

н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Панели за сероконверсия Ако са налични Чувствителност за сероконверсия, сравнима с чувствителността на други изделия с маркировка „СЕ“ Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Стандарти Неприложимо Неприложимо Отрицателни проби (7) ≥ 200 проби от неинфектирани и неваксинирани лица (8) специфичност ≥ 98 % (9) ≥ 100 от хоспитализирани пациенти (без инфекция със SARS-CoV-2) Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност общо ≥ 100 включително RF+, бременни жени, проби с антитела срещу ендемични човешки коронавируси 229E, OC43, NL63, HKU1 и други патогени на респираторни заболявания като грип A, B, RSV и др. (1) При изделия, с които се откриват едновременно IgM и IgA, по 200 проби за всеки от маркерите IgM и IgA. (2) Предоставя се подробна информация за периода от време между вземането на пробата и появата на симптомите (или времето на заразяване, ако има такова). (3) Производителят представя обосновка за пригодността и времето за оценка на чувствителността за IgM и IgA при ваксинираните лица. (4) Диагноза въз основа на потвърден положителен резултат за SARS-CoV-2, получен с NAT. (5) Твърденията за чувствителност се уточняват в зависимост от времето между вземането на пробата след появата на симптоми или поставянето на първоначалната диагноза с PCR и теста. (6) Маркировка „CE“ съгласно Регламент (ЕС) 2017/746 като изделия от клас D, ако има такава. (7) Отрицателните проби са от лица без анамнеза за инфекция със SARS-CoV-2 (ако има такива преди пандемията). (8) Лица, които са ваксинирани срещу антиген, различен от използвания в изделието, могат да бъдат включени, ако е подходящо. (9) Погрешно положителните резултати се изясняват чрез повторно тестване с други серологични тестове за SARS-CoV-2, ако е необходимо с различен дизайн на теста и антигенно покритие в сравнение с първоначалния тест, и/или чрез тестване за потвърждение. Изясняването на погрешно положителните резултати може да включва допълнително тестване за наличие на други типове anti-SARS-CoV-2 антитела (IgA, IgG, общи антитела).

Таблица 3: Тестове за потвърждение или допълнителни (1) тестове за anti-SARS-CoV-2 Характеристика на действието Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Диагностична чувствителност Положителни проби ≥200 включително проби преди и след сероконверсия (през първите 21 дни и 21 дни след появата на симптомите) Правилно определяне като „положителни“ (или „неопределени“) Панели за сероконверсия/панели с нисък титър ако е наличен . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 5 1

Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Характеристика на действието Диагностична чувствителност Аналитична чувствителност Диагностична специфичност Стандарти Неприложимо Неприложимо Отрицателни проби (2) ≥ 200 от незаразена/неваксинирана популация Няма погрешно положителни резултати; правилно определяне като „отрицателни“ (или „неопределени“) Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 200 от хоспитализирани пациенти (без инфекция със SARS-CoV-2) общо ≥ 50 включително проби с антитела срещу ендемични човешки коронавируси 229E, OC43, NL63, HKU1 и други патогени на респираторни заболявания като грип A, B, RSV и др. включително проби с неопределени или погрешно положителни резултати при други тестове за anti-SARS-CoV-2 (1) Напр. имуноблот с антигени, различни от използваните в първоначалния тест за антитела. (2) Отрицателните проби са от лица без анамнеза за инфекция със SARS-CoV-2 (ако има такива преди пандемията). Таблица 4: Антигенни тестове (включително бързи тестове): SARS-CoV-2

Проба Брой проби, характеристики, употреба Критерии за приемане Положителни проби ≥ 100 (1) Положителни проби съгласно NAT (2) от фазата на ранна инфекция през първите 7 дни след появата на симптомите (3); пробите представляват вирусни натоварвания, които се появяват спонтанно (4); отчитане на генетичните варианти (5); отчитане на различията при вземането на пробите и/или обработването им (6) Откриване > 80 % (бързи тестове); откриване > 85 % (лабораторни анализи (7)); спрямо SARS-CoV-2-NAT (8), (9) Стандарти Веднага щом станат налични Установяване на LOD (10) Отрицателни проби ≥ 300 от неинфектирани лица Кръстосана реактивност Проби с потенциална кръстосана реактивност ≥ 100 от хоспитализирани пациенти общо ≥ 50 включително положителни проби за ендемични човешки коронавируси 229E, OC43, NL63, HKU1; грип А, В, RSV и други патогени на респираторни заболявания, подходящи за диференциална диагноза; включително бактерии (11), намиращи се в зоната за вземане на проби Специфичност > 98 % (бързи тестове) Специфичност > 99 % (лабораторни анализи (7))

Установяват се потенциалните ограничения на специфичността, ако има такива L 1 7 8 / 5 2 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

(1) Ако изделието е предназначено да се използва за повече от един тип проби, се изискват 100 проби за всеки тип проба. Ако това не е възможно при извънредни обстоятелства (напр. ако вземането на проби е много инвазивно), производителят представя обосновка и доказателства за еквивалентността на матрицата. (2) Вземането на проби е съобразено с тестването за антигени и с NAT, напр. едновременно се вземат две проби от всяко лице или се извършва оптимално тестване с NAT и за антигени от една и съща проба (напр. от елуата от един тампон); буферната/транспортната среда трябва да е съвместима с тестване за антигени; всяка промяна в обема на буфера/средата за поемане на проба между антигенно изделие и изделие с NAT, се съобщава ясно. (3) Или времето на заразяване, ако е известно, като се вземе предвид инкубационният период. (4) Т.е. без предварителен подбор; вирусните натоварвания и разпределението им се представят напр. чрез характеризиране с помощта на стойностите на Ct при RT-PCR; или се трансформират във вирусно

натоварване на ml или проба, ако е приложимо. (5) В зависимост от дизайна на изделието и естеството на генетичния вариант. За целите на оценката се представят най-малко 3 проби за всеки съответен генетичен вариант. (6) Елементите за вземане и извличане на проби, като например тампони, буфери за извличане и т.н., са част от оценката. Ако в изделието не е включено собствено за производителя вземане на проби/приготвяне на проби, действието на изделието се изследва за приложима гама от изделия за вземане на проби. Ако пробата не се тества веднага, напр. след определено време за транспортиране, се изследва стабилността на антигена. (7) Различни от бързите тестове, т.е. официални лабораторни изделия, напр. ензимно-свързан имуносорбентен анализ, автоматични тестове и др. (8) Чувствителността ≥ 80 %, съответно ≥ 85 %, е за всички заявени типове проби. Всички заявени типове проби се сравняват със съпоставените резултати от NAT от назофарингеални проби. (9) Връзката между чувствителността на антигенния тест и NAT се доказва; чувствителността може да бъде представена спрямо различни диапазони на вирусно натоварване и спрямо прага на инфекциозност. Описва

се използваният метод за NAT и извличане. (10) Ако няма наличен международен стандарт, аналитичната чувствителност може да бъде тествана чрез серии от разреждания на вътрешни вирусни препарати в сравнение с други антигенни тестове и NAT; ако се използва инактивиран вирус, се изследва въздействието на инактивирането и на замразяването/размразяването върху антигена. (11) Напр. стафилококи и стрептококи, експресиращи протеин A или G. Характеристика на действието Чувствителност Таблица 5: Изделия с NAT за РНК на SARS-CoV-2 Проба Качествено определяне на РНК на SARS-CoV-2 Количествено определяне на РНК на SARS-CoV-2 Аналитична чувствителност: LOD Първи международен стандарт на СЗО за РНК на SARS- CoV-2 (код NIBSC: 20/146; 7,70 log10 IU/ml) Вторични стандарти, калибрирани спрямо МС на СЗО Съгласно Евр. фарм., Ръководство за валидиране на NAT: няколко серии от разреждания до граничната концентрация; статистически анализ (напр. Probit анализ) на базата на поне 24 репликата; изчисляване на 95 % гранична стойност

Съгласно Евр. фарм., Ръководство за валидиране на NAT: няколко серии от разреждания на калибрирани референтни препарати до граничната концентрация; статистически анализ (напр. Probit анализ) на базата на поне 24 репликата; изчисляване на 95 % гранична стойност като LOD Граница на количественото определяне; характеристики на количественото определяне Първи международен стандарт на СЗО за РНК на SARS- CoV-2 (код NIBSC: 20/146; 7,70 log10 IU/ml) Вторични стандарти, калибрирани спрямо МС на СЗО Разреждания (полу-log10 или по-малко) на калибрирани референтни препарати; определяне на долна и горна граница на количествено определяне, LOD, прецизност, точност, „линеен“ обхват на измерване, „динамичен обхват“. Като вторичен стандарт за постигане на по-високи равнища на концентрацията може да се използва синтетична целева нуклеинова киселина. Да се докаже възпроизводимостта при различни равнища на концентрацията . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з

L 1 7 8 / 5 3

Диагностична чувствителност: различни щамове на РНК на SARS- CoV-2 Ефективност на количественото определяне Инклузивност Специфичност Диагностична специфичност In silico анализ (2) Проби от пациенти, определени като положителни за РНК на SARS-CoV-2 от сравнително изделие, от различни региони и клъстери на епидемичния взрив; варианти на секвенцията Серии от разреждания на положителни за SARS-CoV-2 клетъчни култури (изолати) е възможно да послужат като потенциални заместители Положителни за РНК на SARS-CoV-2 проби от пациенти от различни региони и клъстери на епидемичния взрив; варианти на секвенцията с количествени стойности, получени от сравнително изделие Серии от разреждания на положителни за РНК на SARS- CoV-2 клетъчни култури е възможно да послужат като потенциални заместители In silico анализ (2); поне два независими целеви региона в гена при едно извършване на теста (дизайн с двойна цел) ≥ 100 (1) ≥ 100 Доказателство за подходящ дизайн на изделието: подравняване на секвенцията на праймера/ сондата с публикуваните секвенции на SARS- CoV-2

Доказателство за подходящ дизайн на изделието: подравняване на секвенцията на праймера/сондата с публикуваните секвенции на SARS-CoV-2 Човешки проби, отрицателни за РНК на SARS-CoV-2 ≥ 500 ≥ 100 Кръстосана реактивност положителни проби (с различни концентрации) за сродни човешки коронавируси 229E, HKU1, OC43, NL63, коронавирус MERS; SARS CoV-1, ако е наличен; Грипен вирус А, В; RSV; Legionella pneumophila; положителни клетъчни култури е възможно да послужат като потенциални заместители Устойчивост Пренос Доказателство за подходящ дизайн на изделието (подравняване на секвенциите); редовна проверка на секвенциите на праймерите/сондите спрямо записите в банката с данни за секвенциите Доказателство за подходящ дизайн на изделието (подравняване на секвенциите); редовна проверка на секвенциите на праймерите/сондите спрямо записите в банката с данни за секвенциите общо ≥ 20 общо ≥ 20 Най-малко 5 серии, като се редуват силноположителни проби и отрицателни проби. Вирусните титри на силноположителните проби са представителни за високите вирусни титри, които се появяват спонтанно.

Най-малко 5 серии, като се редуват силноположителни проби (за които се знае, че се появяват спонтанно) и отрицателни проби L 1 7 8 / 5 4 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .

Инхибиране Общ процент на грешки, водещи до погрешно отрицателни резултати: 99/100 положителни резултата от теста Вътрешен контрол, използван за предпочитане през цялото времетраене на пълната процедура с NAT ≥ 100 проби, инжектирани с вирус с три пъти концентрацията, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати (3 x LOD) Вътрешен контрол, използван за предпочитане през цялото времетраене на пълната процедура с NAT ≥ 100 проби, инжектирани с вирус с три пъти концентрацията, която дава граничната стойност при 95 % положителни резултати (3 x LOD) (1) Ако изделието е предназначено да се използва за повече от един тип проби, се изискват 100 проби за всеки тип проба. Ако това не е възможно при извънредни обстоятелства (напр. ако вземането на проби е много инвазивно), производителят представя обосновка и доказателства за еквивалентността на матрицата. (2) Производителят представя доказателства за проактивни редовни надзорни проверки спрямо актуализираните записи в банката с данни в доклада за проследяването на действието след пускане на пазара.

Характеристика на действието Тълкуване на резултатите (3) Таблица 6: Допълнителни изисквания за антигенните тестове за самотестване за SARS-CoV-2 (1) Проби (2) Тълкуване на резултати (4) от неспециалисти, отразяващо следните равнища на реактивност на резултатите: — нереактивни — реактивни — слабореактивни (5) — невалидни Диагностична чувствителност (6) Неспециалисти, за които е известно, че са с положителни резултати за наличие на антигени (7), (8) Диагностична специфичност (9) Неспециалисти, които не знаят статуса си (5) Брой неспециалисти ≥ 100 ≥ 30 ≥ 60 (1) Приема се, че основното действие на теста за самотестване вече е било доказано с оценката/преценката на теста за професионална употреба, който е със същия дизайн като съответния оценяван тест за самотестване. В случай че за въпросните проби за самостоятелна употреба няма съответен вариант на тест за професионална употреба, се прави сравнение със стандартния тип проби (напр. назофарингеален секрет за антигенен тест, серум или плазма за тест за антитела) за съответния тест за професионална употреба.

(2) За всеки тип проба за самостоятелна употреба, заявен с изделието (напр. назален секрет, храчка, слюнка, цяла кръв и т.н.). (3) В проучването за тълкуване на резултатите се включва отчитане и тълкуване на резултати от тестове от най-малко 100 неспециалисти, като всеки неспециалист трябва да отчете резултати, покриващи посочения диапазон на равнища на реактивност на резултатите. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (4) Тестовете се провеждат преди проучването за тълкуване на резултатите, като по възможност се използва типът на пробата, предвиден от производителя. Тестовете могат да се извършват със симулирани проби на база на естествената матрица на съответния тип проба. (5) По-голяма част от пробите са в диапазона на слабоположителните резултати, близки до граничната стойност или LOD на теста. (6) Спрямо RT-PCR. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (7) Лица, които не са наясно с резултата от професионалната диагностика преди самотестването и които изпълняват цялата процедура на теста — от вземането на пробата и предварителната ѝ обработка (вземане с

тампон, извличане с буфер и т.н.) до отчитането. (8) Лица до около 7 дни след появата на симптомите. (9) Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. . . 5 7 2 0 2 2 г . B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з L 1 7 8 / 5 5

Таблица 7: Допълнителни изисквания за тестовете за самотестване за антитела срещу SARS-CoV-2 (1) Характеристика на действието Проби (2) Брой неспециалисти Тълкуване на резултатите (3) Диагностична чувствителност (6) Тълкуване на резултати (4) от неспециалисти, отразяващо следните равнища на реактивност на резултатите: — нереактивни — реактивни — слабореактивни (5) — невалидни Неспециалисти, за които е известно, че са с положителни резултати за наличие на антитела (7) Диагностична специфичност (8) Неспециалисти, които не знаят статуса си (5) ≥ 100 ≥ 100 ≥ 100 (1) Приема се, че основното действие на теста за самотестване вече е било доказано с оценката/преценката на теста за професионална употреба, който е със същия дизайн като съответния оценяван тест за самотестване. В случай че за въпросните проби за самостоятелна употреба няма съответен вариант на тест за професионална употреба, се прави сравнение със стандартния тип проби (напр. назофарингеален секрет за антигенен тест, серум или плазма за тест за антитела) за съответния тест за професионална употреба.

(2) За всеки тип проба за самостоятелна употреба, заявен с изделието (напр. назален секрет, храчка, слюнка, цяла кръв и т.н.). (3) В проучването за тълкуване на резултатите се включва отчитане и тълкуване на резултати от тестове от най-малко 100 неспециалисти, като всеки неспециалист трябва да отчете резултати, покриващи посочения диапазон на равнища на реактивност на резултатите. Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (4) Тестовете се провеждат преди проучването за тълкуване на резултатите, като по възможност се използва типът на пробата, предвиден от производителя. Тестовете могат да се извършват със симулирани проби на база на естествената матрица на съответния тип проба. (5) По-голяма част от пробите са в диапазона на слабоположителните резултати, близки до граничната стойност или LOD на теста. (6) С предишна анамнеза за първоначална инфекция със SARS-CoV-2, потвърдена с RT PCR; в сравнение с предишен потвърден резултат за антитела; Производителят определя съответствието между отчитането,

извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. (7) Лица, които не са наясно с резултата от професионалната диагностика преди самотестването и които изпълняват цялата процедура на теста — от вземането на пробата и предварителната ѝ обработка (вземане с тампон, извличане с буфер и т.н.) до отчитането. (8) Производителят определя съответствието между отчитането, извършено от неспециалист, и отчитането, извършено от професионален потребител. L 1 7 8 / 5 6 B G О ф и ц и а л е н в е с т н и к н а Е в р о п е й с к и я с ъ ю з . . 5 7 2 0 2 2 г .